HLA精準分型檢測為移植配型提供了重要理論依據，供者與受者HLA高分辨相合的移植可以提高患者的生存率，降低移植物抗宿主病發(fā)生機率。采用分子生物學手段對HLA進行分型檢測已廣泛應用于臨床醫(yī)療服務，如異體器官移植、造血干細胞移植、安全輸血，以及各種疾病關聯(lián)和藥物基因組學應用中。

為了準確鑒定HLA分型，提升檢測的準確率，海希生物基于華大智造DNBSEQ-G99測序平臺推出HLA分型檢測產品-HLA高分辨分型17位點檢測試劑盒（高通量測序），該產品采用雜交捕獲法，在G99平臺快速、靈活、簡單的優(yōu)勢助力下，通過一次實驗與檢測，可同時準確、快速獲取17個HLA等位基因的四位數分型結果。

01 產品方案

海希生物HLA分型檢測產品針對HLA的17個基因進行檢測，每個基因的目標區(qū)域設計加密探針，全面覆蓋完整的外顯子區(qū)域。HLA分型檢測產品可兼容多種樣本類型，包括外周血、口腔拭子、骨髓、臍帶血等。該產品包含的具體基因及類別見下表。

表1 海希生物HLA分型檢測產品覆蓋基因展示

02 檢測流程

圖1 海希生物HLA分型檢測流程

03 探針性能

1.海希研發(fā)團隊自主設計探針，充分考慮基因的多態(tài)性，實現對所有型別的有效捕獲，并根據最新IMGT_HLA 3.52數據庫進行探針補充，保證型別準確報出。

2.采用非重疊平鋪式探針設計，利用6000多條探針即可捕獲約216kb目標區(qū)域，且捕獲均一性極好，如左下圖所示為本次測試的16例樣本所有位點的平均測序深度均在200左右，右下圖即可直接展示出覆蓋度的均一性情況。

圖2 海希生物HLA共16個樣本覆蓋度展示

04 測試結果

1.海希生物HLA分型檢測方法與PCR-SBT檢測方法分型結果比對

選用UCLA室間質評標準品共16例，利用海希生物HLA分型檢測流程進行檢測，同時對這16例樣本進行PCR-SBT分型檢測。對樣本整體檢測結果評估，結果表明，海希生物通過G99測序的HLA分型檢測的分型結果與PCR-SBT分型結果比對一致，符合率達到100%。分型檢測中，使用的試劑盒產品包含：1）海希生物HLA 高分辨分型17 位點檢測試劑盒（NGS）；2）940-001647-00 DNBSEQ 一步法DNB制備試劑盒 V4.0 OS-App 4 Rxn/Kit；3）940-000413-00 DNBSEQ-G99RS高通量測序試劑套裝（G99 SM App-C FCL PE150）。具體分型結果見附錄。

表2 海希生物HLA與PCR-SBT分型檢測結果對比

2.海希生物HLA分型檢測結果與室間質評提供的標準分型結果比對

同時，對于以上16個室間質評樣本的HLA II類基因在G99上的檢測結果與室間質評提供的標準分型結果比對，四分位分型完全一致(見下表)。

表3 HLA與標準分型檢測結果對比

05 海希生物HLA產品分析亮點

1.HLA基因多態(tài)性與人類多種疾病和用藥具有高度相關性：結果可展示CPIC指南用藥相關型別和常見疾病相關型別。

2.根據IMGT/HLA網站，結果可提示受/供者HLA-B先導基因型和移植后患GVHD風險。

圖3 HLA基因與疾病相關性

06 海希生物HLA產品特點總結

高效：自主設計探針捕獲效率高，目標基因捕獲區(qū)域覆蓋均一性好。

準確：覆蓋HLA低、中、高分辨分型，正確率100%。分型精度一般為4 位或者6位，最高可達8位精度分型，有效解決其他技術無法判定的模棱兩可型別。

專業(yè)：專業(yè)研發(fā)和服務團隊，可幫助客戶發(fā)現新基因型別和開展后續(xù)科研工作。

經濟：使用HLA高分辨分型17位點檢測(高通量測序)項目試劑盒，支持大批量樣本上機，能有效降低實驗成本。

07 G99在HLA分型檢測應用中的優(yōu)勢

1.24小時內完成HLA全流程檢測

G99在12小時內即可完成PE150測序，顯著縮短了檢測的總時間。在移植醫(yī)學或免疫學領域，快速的結果反饋能夠為患者提供更迅捷的治療決策。

2.簡單便捷的操作流程

G99操作界面直觀簡潔，確保實驗室人員能夠方便、準確地進行檢測，操作方法簡單易學。

3.靈活多樣的上機模式

G99的雙載臺設計，可隨時開啟測序工作，適應多樣化的應用需求，同時實現檢測的準確性和廣泛性。

G99測序儀幫助用戶在HLA分型檢測的應用中24小時內極速獲取準確的檢測結果，為高通量測序技術在HLA分型檢測拓展了更多的應用場景。2023年9月，G99已獲批國家藥品監(jiān)督管理局(NMPA)醫(yī)療器械注冊證，被準許在國內市場應用于臨床，支持臨床方向多種DNA和RNA基因檢測應用需求。G99以其極致的測序速度、靈活簡單的上機體驗、高效多樣的測序選擇，持續(xù)賦能用戶，助力行業(yè)發(fā)展。

附錄